thermo賽默飛Qubit4.0熒光計(jì)正確合理使用方法是什么？

這是一臺(tái)高精度、專門用于定量dsDNA、RNA、蛋白質(zhì)等微量核酸和蛋白的儀器。正確使用不僅能獲得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)，還能延長(zhǎng)儀器的使用壽命。以下將從操作流程、關(guān)鍵注意事項(xiàng)、日常維護(hù)和常見問題四個(gè)方面進(jìn)行詳細(xì)說明。

一、賽默飛Qubit4.0熒光計(jì)標(biāo)準(zhǔn)操作流程

1、開機(jī)預(yù)熱：

連接電源，按下儀器后方開關(guān)啟動(dòng)。

儀器會(huì)進(jìn)行自檢。讓儀器預(yù)熱至少10-15分鐘，以確保光源穩(wěn)定，這是獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)的關(guān)鍵一點(diǎn)。

2、選擇 assay 類型：

在觸摸屏主界面選擇“新測(cè)定"。

從列表中選擇您要檢測(cè)的樣本類型，例如 “dsDNA HS (高靈敏度)" 。儀器會(huì)自動(dòng)匹配所需的試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3、準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品（強(qiáng)烈推薦?。?/span>

雖然Qubit使用存儲(chǔ)的默認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)曲線，但為了獲得MAX 精度，特別是對(duì)于極其關(guān)鍵的樣本，建議使用試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。

取兩個(gè)0.5mL的Qubit專用試管，分別標(biāo)記為“S1"和“S2"。

按試劑盒說明書要求，向每個(gè)試管中加入190 μL的緩沖液和10 μL的標(biāo)準(zhǔn)品（S1和S2），充分混勻?？傮w積為200 μL。

注意：對(duì)于RNA和Protein assay，標(biāo)準(zhǔn)品的加入量可能不同，請(qǐng)務(wù)必查閱對(duì)應(yīng)試劑盒的說明書。

4、準(zhǔn)備樣品：

取0.5mL Qubit專用試管，進(jìn)行標(biāo)記。

加入199 μL的緩沖液和1 μL的待測(cè)樣本（對(duì)于DNA HS assay），充分混勻?？傮w積同樣為200 μL。

重要：樣本濃度需落在該assay的檢測(cè)范圍內(nèi)（如DNA HS: 0.2 - 100 ng）。如果樣本濃度過高，需用緩沖液（Buffer） 進(jìn)行稀釋，而不是用水，否則會(huì)破壞熒光信號(hào)的產(chǎn)生環(huán)境。

5、進(jìn)行檢測(cè)：

將試管蓋緊，用無塵紙擦拭干凈管壁，避免指紋或液體影響光路。

在主界面點(diǎn)擊“讀取標(biāo)準(zhǔn)品"，先放入S1，點(diǎn)擊“讀取"，再放入S2，點(diǎn)擊“讀取"。校準(zhǔn)完成后，界面會(huì)顯示“標(biāo)準(zhǔn)曲線已就緒"。

選擇“運(yùn)行樣品"，依次放入準(zhǔn)備好的樣本管，點(diǎn)擊“讀取"。儀器會(huì)直接顯示濃度值（如 ng/μL）。

快捷操作：如果選擇不使用標(biāo)準(zhǔn)品，可以直接選擇“使用默認(rèn)曲線"來運(yùn)行樣品，但精度會(huì)略有下降。

6、記錄數(shù)據(jù)和關(guān)機(jī)：

數(shù)據(jù)可以手動(dòng)記錄，也可以通過USB接口導(dǎo)出報(bào)告。

完成后，取出所有試管，在主界面選擇“關(guān)機(jī)"。

二、日常維護(hù)與保養(yǎng)

1、清潔：

日常：每次使用后，用柔軟的無塵紙蘸取少量去離子水輕輕擦拭樣品倉。確保倉內(nèi)無液體、灰塵或纖維殘留。

頑固污漬：可用70%的乙醇擦拭，但需等待乙醇揮發(fā)后再開機(jī)或放入樣品管。

2、校準(zhǔn)：建議定期使用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保儀器的準(zhǔn)確性。如果實(shí)驗(yàn)室溫濕度變化較大，或儀器搬動(dòng)后，也應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)。

3、環(huán)境：將儀器放置在穩(wěn)定、潔凈、干燥的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，避免陽光直射和強(qiáng)烈的振動(dòng)。

三、見問題與解決（Troubleshooting）

1、讀數(shù)不穩(wěn)定或波動(dòng)大：

原因：試管壁不干凈（有指紋、液體）、試管未放到底、氣泡過多、樣本未充分混勻。

解決：擦拭試管，確保放置到位，渦旋振蕩混勻樣本。

2、錯(cuò)誤：“濃度過高"：

原因：樣本濃度超出檢測(cè)范圍。

解決：用相應(yīng)的緩沖液稀釋樣本后重新檢測(cè)。

3、錯(cuò)誤：“濃度過低"或負(fù)值：

原因：樣本濃度低于檢測(cè)下限，或緩沖液/水中有熒光污染物。

解決：檢查使用的緩沖液是否純凈。確認(rèn)檢測(cè)的是否為超微量樣本。

4、結(jié)果與NanoDrop或其他儀器差異大：

原因：這是正常現(xiàn)象。Qubit基于熒光染料特異性結(jié)合目的分子（如雙鏈DNA），因此受鹽、蛋白、游離核苷酸等雜質(zhì)影響小，結(jié)果更準(zhǔn)確反映有效濃度。而NanoDrop基于紫外吸收，任何在260nm有吸收的物質(zhì)（如RNA、降解DNA、胍鹽）都會(huì)干擾結(jié)果，導(dǎo)致虛高。

結(jié)論：Qubit的結(jié)果對(duì)于下游需要精確DNA量的實(shí)驗(yàn)（如NGS建庫、qPCR）更具參考價(jià)值。

四、總結(jié)

正確合理的用法：

預(yù)熱 → 選方法 → (建議校準(zhǔn)) → 精確配制樣品(專用管+緩沖液+準(zhǔn)確體積) → 孵育 → 清潔上機(jī) → 在范圍內(nèi)讀數(shù) → 妥善維護(hù)。

遵循以上步驟和注意事項(xiàng)，您就能充分發(fā)揮Qubit 4.0準(zhǔn)確、靈敏的優(yōu)勢(shì)，為您的實(shí)驗(yàn)提供可靠的數(shù)據(jù)支持。對(duì)于使用或更換檢測(cè)類型，請(qǐng)務(wù)必詳細(xì)閱讀試劑盒說明書。