ABI賽默飛超微量分光光度計實驗操作具體步驟

賽默飛（Thermo Fisher Scientific）的超微量分光光度計（常見的是 NanoDrop™ One/OneC 或 NanoDrop™ Eight 系列）的操作流程非常直觀和簡潔。以下是詳細(xì)的實驗操作流程，以經(jīng)典的NanoDrop One檢測雙鏈DNA（dsDNA）樣本為例。其他類型樣本（如RNA、蛋白質(zhì)）的流程基本相同，主要在軟件設(shè)置上選擇不同的檢測模式。

一、賽默飛超微量光度計實驗前準(zhǔn)備

1、開機(jī)與初始化：

打開主機(jī)電源。

啟動電腦上的 NanoDrop™ 軟件。軟件會自動識別儀器并進(jìn)行自檢（活塞升降、光源檢測等），等待軟件主界面出現(xiàn)。

2、清潔上下測量基座（最關(guān)鍵步驟！）：

取一張無屑的精細(xì)擦拭紙（如Kimwipe）。

滴加 2-3 μL 超純水 在下測量基座上。

輕輕合上上臂，讓上下基座通過水膜接觸，然后迅速抬起上臂。

用另一張干凈的擦拭紙擦干上下基座表面，確保無任何水漬、指紋或樣品殘留。

警告：任何殘留都會導(dǎo)致測量結(jié)果嚴(yán)重不準(zhǔn)！

3、準(zhǔn)備空白對照（Blank）與待測樣本：

準(zhǔn)備用于溶解樣本的緩沖液（如TE buffer、無菌水）作為空白液。

將待測樣本短暫離心，使管壁上的液滴集中到管底。

根據(jù)需要，將樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋（通常使測量值落在儀器線性范圍內(nèi)比較好）。

二、賽默飛超微量光度計實驗測量步驟

1、選擇檢測模式：

在軟件主界面選擇您要測量的樣本類型，例如：核酸 (Nucleic Acid) -> DNA-50 (表示dsDNA模式)。

2、進(jìn)行空白校正（Blank）：

在下方基座上滴加 1-2 μL 空白溶液（如TE buffer）。

放下儀器上臂，使上下基座通過液柱連接。

點擊軟件上的 “空白" (Blank) 按鈕。

校正完成后，抬起上臂，用擦拭紙清潔上下基座（方法同前）。

3、測量樣品：

在清潔后的下基座上滴加 1-2 μL 待測樣本。

注意：樣本量不宜過多或過少，1-2 μL足以形成穩(wěn)定的液柱。

放下儀器上臂。

點擊軟件上的 “測量" (Measure) 按鈕。儀器會立即顯示測量結(jié)果。

4、記錄數(shù)據(jù)與清潔：

記錄或直接保存數(shù)據(jù)。

抬起上臂，立即清潔上下基座，防止樣本干燥殘留。

重復(fù)步驟3和4，測量下一個樣本。

三、實驗后操作

完成測量：

1、測量完所有樣本后，在基座上滴加超純水，進(jìn)行一次清潔和擦拭。

確?；稍铩崈?。

2、關(guān)閉軟件和儀器：

退出NanoDrop軟件。

關(guān)閉儀器主機(jī)電源。

四、注意事項與常見問題

1、清潔是關(guān)鍵！ 每次測量后必須清潔，這是保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的最重要前提。殘留的樣本是誤差來源。

2、樣本量：1-2 μL即可，無需過多。液柱能穩(wěn)定形成即可。

3、氣泡：加樣時盡量避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會散射光線，影響結(jié)果。

4、樣本純度：

A260/A280：純DNA約為1.8，純RNA約為2.0。比值過低可能表示有蛋白質(zhì)污染。

A260/A230：應(yīng)大于2.0。比值過低可能表示有鹽類或有機(jī)溶劑（如胍鹽、酚、乙醇等）污染。

5、濃度范圍：雖然NanoDrop的線性范圍很寬，但對于濃度高（光譜曲線出現(xiàn)平頭峰）或極低的樣本，建議進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再測，結(jié)果更為可靠。

6、對于NanoDrop Eight（8聯(lián)機(jī)）：操作原理相同，只是有8個通道。需要確保每個通道的檢測基座都清潔干凈，并且空白校正和樣本加載對應(yīng)到同一個通道。