BioRad伯樂MicroPulser電穿孔儀1652100使用方法是什么?

以下是詳細(xì)的操作方法、注意事項和故障排查指南。重要安全聲明：

操作前務(wù)必閱讀并理解伯樂提供的用戶手冊。

電轉(zhuǎn)儀工作時會產(chǎn)生高壓電，務(wù)必遵守安全規(guī)程，防止觸電。

操作時需佩戴個人防護裝備（PPE），如手套和護目鏡。

一、伯樂1652100電穿孔儀操作前準(zhǔn)備

1、設(shè)備與耗材：

MicroPulser 電轉(zhuǎn)儀主機

電轉(zhuǎn)杯（Electroporation Cuvette），常用規(guī)格為 0.1 cm 或 0.2 cm 極間距。務(wù)必使用一次性電轉(zhuǎn)杯，且不能重復(fù)使用。

預(yù)冷的無菌離心管（如 1.5 mL）

預(yù)冷的復(fù)蘇培養(yǎng)基（如 SOC 或 LB 培養(yǎng)基）

預(yù)冷的無菌水或甘油水（用于洗滌細(xì)胞）

待轉(zhuǎn)化的 DNA（通常為質(zhì)粒、連接產(chǎn)物等）。DNA 應(yīng)溶于 低離子強度緩沖液（如 TE 或水） 中，高鹽分會導(dǎo)致電弧放電（打火），殺死細(xì)胞。

2、感受態(tài)細(xì)胞制備：

細(xì)胞需要被制備成電擊感受態(tài)細(xì)胞。這與化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的制備方法不同，通常需要多次洗滌以去除離子。

細(xì)胞應(yīng)在冰上保持低溫，操作過程應(yīng)迅速，以維持細(xì)胞的高效率。

二、伯樂1652100電轉(zhuǎn)儀標(biāo)準(zhǔn)操作步驟（以大腸桿菌為例）

1、開機預(yù)熱：

連接電源，打開儀器背面的開關(guān)。儀器會進行自檢，顯示屏亮起。

根據(jù)需要，通過面板上的按鈕選擇相應(yīng)的程序。對于見的大腸桿菌，通常選擇模式 "Ec1" （E. coli 1）。其他模式（如 Ec2, Yeast, Bact）用于其他特定細(xì)胞類型。

2、準(zhǔn)備細(xì)胞-DNA 混合液：

從 -80°C 冰箱中取出一管電擊感受態(tài)細(xì)胞，立即置于冰上讓其緩慢解凍（或用手心捂幾秒后立刻放回冰上）。

向預(yù)冷的無菌離心管中加入 1-100 ng 的 DNA（體積通常 < 5 µL）和 50-100 µL 的感受態(tài)細(xì)胞。

用移液器輕柔地混勻（避免產(chǎn)生氣泡），并立即放回冰上。整個過程要快。

3、加樣到電轉(zhuǎn)杯：

取一個 0.1 cm 或 0.2 cm 的潔凈電轉(zhuǎn)杯，放在冰上預(yù)冷。

將細(xì)胞-DNA 混合液全部（或大部分）轉(zhuǎn)移到電轉(zhuǎn)杯的底部，確保液體位于兩個電極之間，不要產(chǎn)生氣泡。

擦干電轉(zhuǎn)杯外壁的水分，防止電流短路。

4、電擊：

將電轉(zhuǎn)杯平穩(wěn)地放入儀器樣品室的金屬槽中，確保與電極接觸良好。

快速用力地關(guān)上樣品室蓋子。蓋子會自動放電或需要手動按下按鈕。

按下脈沖觸發(fā)按鈕（Pulse）。你會聽到一聲蜂鳴音，屏幕上可能顯示實際的脈沖時間（約 4-5 ms）和電壓。

5、復(fù)蘇：

立即打開蓋子，取出電轉(zhuǎn)杯。

迅速向電轉(zhuǎn)杯中加入 0.5 - 1 mL 預(yù)溫（室溫或37°C）的復(fù)蘇培養(yǎng)基（如 SOC）。

用移液器輕輕吹吸數(shù)次，將細(xì)胞重懸并轉(zhuǎn)移到一個無菌的離心管中。

將離心管置于 37°C 搖床中，150-225 rpm 復(fù)蘇 45-90 分鐘，讓細(xì)胞恢復(fù)并表達抗生素抗性基因。

5、涂板篩選：

將復(fù)蘇后的菌液適當(dāng)稀釋（或離心后重懸于少量培養(yǎng)基），涂布在含有相應(yīng)抗生素的篩選平板上。

倒置平板，于 37°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 12-16 小時，觀察轉(zhuǎn)化子。

6、關(guān)機與清潔：

實驗結(jié)束后，關(guān)閉電源。

用 70% 乙醇擦拭樣品室，以防污染。

三、成功關(guān)鍵總結(jié)：

1、低離子強度：細(xì)胞和DNA必須無鹽。

2、低溫操作：細(xì)胞始終在冰上。

3、迅速復(fù)蘇：電擊后立即加入培養(yǎng)基拯救細(xì)胞。

4、杜絕電?。菏褂眯码娹D(zhuǎn)杯、避免氣泡、保持干燥。

如果嚴(yán)格按照上述步驟操作仍遇到問題，建議系統(tǒng)性地排查每個環(huán)節(jié)，并從制備新鮮、洗滌電擊感受態(tài)細(xì)胞開始重試。