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    thermo賽默飛miniamp普通PCR系統(tǒng)做實驗常用的染料有哪些?

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    在MiniAmp PCR實驗(通常指小規(guī)?;蚋咄縋CR體系)中,常用的染料主要分為?核酸凝膠電泳染料?和?實時熒光定量PCR染料?兩大類,其選擇需兼顧靈敏度和安全性。以下是具體分類及特性:


    一、核酸凝膠電泳染色染料(用于PCR產(chǎn)物檢測)

    用于瓊脂糖凝膠電泳中DNA條帶的可視化:


    1、SYBR系列(如SYBR Green I)

    與雙鏈DNA特異性結(jié)合后熒光增強,靈敏度高;

    需注意高濃度可能抑制PCR反應(yīng)。


    EvaGreen

    飽和型染料,可在高濃度下使用而不抑制擴增,適合高精度定量和熔解曲線分析。

    GoldView

    低毒性替代EB的染料,激發(fā)后呈綠色熒光

    溴化乙錠(EB)

    經(jīng)典染料,但具強致癌性,操作需嚴格防護,逐漸被淘汰。


    二、實時熒光定量PCR染料(qPCR)

    用于監(jiān)測PCR擴增過程的熒光信號累積:

    1、SYBR Green I

    原理:嵌入DNA雙鏈小溝,熒光信號強度與產(chǎn)物量正相關(guān);

    優(yōu)點:通用性強、成本低;

    缺點:易受引物二聚體干擾,需熔解曲線驗證特異性。

    2、TaqMan探針

    原理:5'端熒光基團與3'端淬滅基團分離后發(fā)光,特異性高。

    優(yōu)勢:適用于SNP檢測及多重PCR,背景噪音低。

    3、分子信標(Molecular Beacons)

    莖環(huán)結(jié)構(gòu)探針,靶序列結(jié)合后發(fā)熒光,適合突變檢測。


    三、特殊場景染料

    1、嵌合型染料(如Syto82、Syto9)對擴增抑制小,靈敏度高。

    2、比色染料(如HNB)通過顏色變化判斷結(jié)果,無需儀器。


    四、總結(jié)

    1、泳檢測:推薦SYBR Safe或GoldView(安全性高)。

    2、qPCR檢測:SYBR Green I(經(jīng)濟通用)或EvaGreen(高穩(wěn)定性)。

    3、特殊應(yīng)用:CF®染料適用于熒光標記探針合成。

    TEL:18016231680

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